کلونینگ و بیان ژن s ویروس تب هموراژیک کریمه کنگو در شرایط پروکاریوتی با روش وسترن بلات

بیماری خون ریزی دهنده کریمه کنگو یک بیماری ویروسی دهنده تب دار حاد مشترک بین انسان و دام است میزان مرگ ومیر گزارش شده این بیماری بین 2 / 0 - 50 است در جنس ارتوبونیاویروس ها قطعه S ویروس پروتیین را کد میکند کهشامل پروتیینهای نوکیوکپسید ) N ( و پروتیین غیر ساختاری ) sNS ( می باشد که به صورت هم پوشان بوسیلهی cRNA کد می شوند. ویروس های هانتاویروس و نایرویروس یک پروتیین بزرگ N کد می کنند ولی هیچگونه پروتیین NS را کدنمی کنند.تشخیص سریع جهت کنترل ، درمان و شناسایی بیماران و همچنین برای مطالعات همه گیر شناسایی حیاتی است. در این پژوهش به بیان ژن s ویروس تب هموراژیک کریمه کنگو در شرایط پروکاریوتی با روش وسترن بلات پرداختهشد.برای این منظور قطعه ای از ژن s با طول 1085 جفت باز توسط جفت پرایمرهای اختصاصی توسط PCR تکثیر داده شد سپس ژن مورد نظر را در وکتور PTG19-T کلون گردید و ژن مورد نظر در باکتری اشرشیا کلای DH5a بیانگردید و ژن CCHF در وکتور PET28 ساب کلون گردید.بیان پروتیین با ژل SDS-PAGE رنگ شده با رنگ کوماسی بلو و وسترن بلات تایید گردید.مشاهده پروتیین مذکور با SDS PAGE بیان گر وجود CCHF با وزن ملکولی KDa 40 را تایید می کند جهت تایید نهایی وسترن بلات نیز باند های پروتیینی kDa 40 نشان داد. نتایج بدست آمده از این مطالعه نشان می دهد کهپروتیین بهینه سازی شده ویروس بخوبی در شرایط پروکاریوتی بیان شده و میزان پروتیین مناسبی به دست آمد.

Keywords:

کلونینگ , ژن s , ویروس تب هموراژیک کریمه کنگو , بیان پروتیین , SDS PAGE , وسترن بلات