آزمونهای زیستی و مولکولی گیاه نخود تراریخته (.L arietinum Cicer )مقاوم به آفت پیلهخوار (Helicoverpa armigera Hub.)

آفت پیلهخوار یکی از عوامل اصلی کاهش عملکرد نخود محسوب میشود و انتقال ژن با هدف افزایش مقاومت به این آفت، از اهداف اصلاحی در این گیاه زراعی میباشد. یکی از راهبردهای موثر برای تولید نخود تراریخته مقاوم به آفت پیلهخوار، استفاده از سموم طبیعی Cry از باکتری باسیلوس تورینجینسیس است. این سموم قادرند در معده حشراتفعال شده و سیستم گوارشی حشره را مختل نمایند. در مطالعه حاضر بررسی ثبات حضور ژن cry1Ac و بیان آن در نسلهای سوم (T3 (و چهارم (T4 (حاصل از نسل دوم نخود تراریخته با ژن cry1Ac و ژن گزینشگر nptII انجام شدتا بتوان به لاینی دست یافت که تنها حاوی ژن cry1Ac بوده و ژن nptII بر اثر نوترکیبی بین دو DNA-T از آن تفکیک شود. آزمون PCR از بین 25نمونه مشکوک در نسل سوم به وجود ژن cry1Ac ،در 6مورد باند مربوط به ژنcry1Ac و باند مربوط به ژن nptII را در تمامی نمونهها نشان داد، ولی از بین این 6نمونه، در آزمون PCR-RT تنها در 5مورد ژن cry1Ac در سطح RNA بیان شد. نتایج PCR در طی نسل چهارم حاکی از وجود باند مربوط به ژن cry1Ac در 73مورد و باند مربوط به ژن nptII در81نمونه از 94مورد بود. در10نمونه از گیاهان تراریخته که حاوی ژنcry1Ac بودند، باند مربوط به ژن nptII مشاهده نگردید که این نشاندهنده آن بود که ژن cry1Ac از ژن nptII تفکیک شده است. نتایج آزمون PCR-RT نیز نشان داد که ژن موردنظر در همه گیاهان تراریخته، در سطح RNA بیانشده است. همچنین نتایج آزمون الایزا نشان داد که در تمام نمونههای مورد آزمون، پروتیین Cry1Ac در لاینهای مختلف در غلظتهای متفاوتی بیان شده است. در آزمون زیستسنجی، لاروهایی که با برگ گیاهان غیرتراریخته تغذیه شدند، همگی زنده ماندند، اما در مقابل لاروهایی که با برگ گیاهان تراریخته نسل T4 تغذیه شدند، همگی بهطور کامل از بین رفتند که این امر نشاندهنده بروز موفقیتآمیز فنوتیپ مورد انتظار میباشد.

Keywords:

آفت پیلهخوار , نخود تراریخته , Bt , cry1Ac