بررسی وضعیت بیان بیومارکرهای ER و HER2 درنمونه های توموری سرطان سینه با استفاده از روش NASBA-ELISA

در بسیاری از بیماری های بدخیم و انواع سرطانها، ژن هایی که تحت تاثیر سایر ژن ها و مسیرهای سیگنالینگ 4 و یا دیگر دلایل اپی ژنتیک ، دست خوش تغییراتی اعم از تغییر سطح بیان، خاموشی و یا روشن شدن نا به جا و...میگردند تحت عنوان بیومارکر برای تشخیص بیماری و یا ردیابی پاسخ بدن به درمان خاص مورد بررسی قرار میگیرند. به طور معمول برای پیگیری وضعیت این بیومارکرها روشهایی چون PCR-RT ،FISH ,CISH ,PCR Time Real و...مرسوم میباشند که روش های وقت گیر و گران قیمتی هستند، و به تجهیزات و تبحر خاصی نیازمندند. در این پژوهش روش آشکارسازی ایزوترمال based sequence acid Nucleic(NASBA (amplification ،که یک روش تکثیر اسید نوکلییک ایزوترمال است و نیازی به دستگاه ترموسایکلر ندارد و دارای مراحل کمتری نسبت به سایر روشهای تکثیر اسید نوکلییک میباشد استفاده شداین روش با همراهی ELISA به دلیل استفاده ی همزمان از پروب و پرایمر اختصاصی دارای اختصاصیت و حساسیت بسیار بالاتری نسبت به سایر روشهای متداول تکثیر اسید نوکلییک میباشد مواد و روشها RNA کل سلولی از بافت مورد نظر استخراج و با وارد کردن نوکلیوتید UTP-11-digoxigenin به عنوان نوکلیوتید نشاندار شده در مخلوط واکنش NASBA ،با 5 پرایمرهای اختصاصی ER و HER2 مولکول RNA نشاندار تولید شد. سپس محصول نشاندار به یک پ روب بیوتینه که در کف پلیت های استرپتوآویدین قرار گرفته است هیبرید گردید. در ادامه، با واکنش الایزا اشکارسازی نهایی انجام شد نتایج به وسیله ی روش ELISA-NASBA وضعیت بیومارکرهای ER و HER2 بر روی هفت مورد نمونه ی توموری و نرمال خریداری شده از تومور بانک بررسی شد که نتایج با اطلاعات ارایه شده توسط تومور بانک مطابقت داشت. بحث ما در پژوهشکده ی فناوری زیستی دانشگاه مالک اشتر برای اولین بار در دنیا، روش ELISA-NASBA را برای بررسی وضعیت بیان ER و HER2 بیومارکرهای اختصاصی سرطان سینه، با حساسیت بسیار بالا وبا نیاز به حداقل میزان RNAکل سلولی ،پیاده سازی نمودیم

Keywords:

ناسبا , سرطان سینه , بیومارکر , استروژن