ابداع محیط کشت جدید Nasiri Sheep blood Modified Medium)NSMM جهت رشد پروماستیگوت های لیشمانیا ماژور: محیط کشت ساده بدون نیاز به سرم جنین گاوی

هدف: انگل های لیشمانیا مولد طیف وسیعی از بیماری های در نقاط مختلف دنیا بوده وتلاش در جهت مبارزه با آن به طرق مختلف از قبیل تهیه و به کارگیری داروهای موثر، ساخت واکسن های پایدار و ... همواره جزو اولویت های سازمان های معتبر جهانی نظیر WHO و مراکز مرتبط با این بیماری در مناطق اندمیک بوده است . پایه تمام این تحقیقات توانایی در تکثیر انبوه انگل می باشد که همواره مسیری پر هزینه است و البته عمده قیمت تمام شده آن نیز به علت سرم جنین گاوی بوده و تلاش در جهت حذف آن جزو اولویت ها می باشد . مواد و روش کار: در تهیه محیط ابتدا بستری شیب دار از پایه آگار-آگاراتوکلاوی مخلوط با خون دفیبرینه و استریل گوسفند را در عمق فلاسک های کشت ایجادنمودیم به نحوی که حالت دینامیکی مانع ازایجادتکانه در پایه جامد می گردید و فضای خالی کافی جهت بررسی انگل بامیکروسکوپ وجود داشت . سپس به عنوان فاز مایع از محیط 1640-RPMI که با لاکتالبومین ، ̹پپتون و عصاره مخمر از هر کدام به میزان 4 گرم در لیتر غنی شده بود استفاده نمودیم به طوری که سطح فاز جامد را کاملا بپوشاند. در هنگام قرار دادن در انکوباتور نیز فلاسک زاویه ملایم با سطح افق ایجاد نمودیم . نتایج و بحث : کشت پروماستیگوت های لیشمانیا ماژور به نسبت های مختلف در محیط NSMM صورت گرفته وجمعیت و الگوی رشد پروماستیگوت ها تحت بررسی قرار داده شد و مشاهده گردید که فاز مایع غنی شده همراه با بستر آگار خون دار قادر به ساپورت رشد سلول ها می باشد به نحوی که در بررسی شکل ، حرکت و تشکیل اشکال روزت با فرم های مناسب با جمعیت قابل قبول در فاز پایان رشد همراه بودیم به طوری که در نسبت های یک به پنج و در مدت شش روز به رشد 40 میلیون سلول در هر میلی لیتر دست یافتیم . اساس و پایه این محیط بر این بود که مواد مورد نیاز انگل در ابتدا از طریق ترکیبات خون و سرم گوسفند فراهم گردد چراکه در تحقیقات صورت گرفته توسط ما قابلیت رشد انگل با سرم گوسفندی اثبات گردیده بود و از طرفی خون کامل hemine مورد نیاز انگل که از موادموثر در رشد تاژکداران خونی می باشد را نیز فراهم می نماید.آلبومین یکی از ترکیبات اصلی موجود در سرم جنین گاوی بوده ودر تحقیقات پیشین نیز اثر بخشی پپتون و عصاره مخمر نیز اثبات شده بود که ما با فرمولاسیون خاص توانستیم شرایط مساعد جهت رشد انگل را فراهم نمائیم .

Keywords:

: NSMM , پروماستیگوت لیشمانیا ماژور , خون گوسفند , 1640-RPMI غنی شده