ارزیابی مقایسه ای روش های الایزای ردیابی آنتی ژن ، Real time RT-PCR و Conventional RT-PCR در تشخیص ویروس تب برفکی

هدف: ویروس تب برفکی یکی از واگیرترین ویروس های دام های زوج سم می باشد ویروس آن از جنس افتاویریده و از خانواده پیکورناویریده می باشد. روش های مختلف آزمایشگاهی جهت شناسایی ویروس FMD در دسترس می باشد. مهم ترین روش های آزمایشگاهی شامل جداسازی ویروس و نیز روش الایزای جستجوی آنتی ژن ( IC-Ag ELISA) و جستجوی ژنوم ویروس به روش RT-PCRمی باشد. مواد و روش کار: در این مطالعه روش های فوق براساس پروتکل های استاندارد آزمایشگاه های رفرانس جهانی تب برفکی (Pirbright) بر روی نمونه های جراحات دهان و سم دریافتی در آزمایشگاه های مرکز تشخیص سازمان دامپزشکی انجام گردید. جهت جداسازی ویروس از خطوط سلولی ۲۱-BHK وIBRS۲ استفاده و نمونه ها ۱ الی ۲ بار پاساژ داده شد. به منظور ردیابی آنتی ژن از کیت های الایزا و با استفاده از سرم پلی والان خوکچه و خرگوش جهت ردیابی ویروس و تعیین سروتایپ های O,A,Asia۱ استفاده گردید. نتایج و بحث : در روش RT-PCR Real time یک مرحله ای با استفاده از پرایمر و پروب های اختصاصی ژن VP۱ ازجایگاه ۵/ UTR و D۳ بهینه سازی و منحنی استاندارد با استفاده از پلاسمید ویروس FMD به دست آمد. کارایی تست (efficienry PCR) مذکور ۹۵٪حاصل گردید.

Keywords:

RT-PCR Real time , الایزا , ردیابی , آنتی ژن جداسازی ویروس , Conventional RT-PCR