همسانه سازی و بیان هترولوگ پروتئاز 1147 مقاوم به حرارت Cohnella sp. A01

پروتئازها، پپتیدازها و یا پروتئینازها (E.C.3.4.-) دسته ای از آنزیم ها هستند که در زیرگروه هیدرولازها قرار می گیرند. پروتئازها دارای فعالیت پروتئولیتیکی هستند و با هیدرولیز باندهای پپتیدی بین اسیدهای آمینه در یک زنجیره پلی پپتیدی، کاتابولیسم پروتئین را باعث شده و در نهایت تولید محصول و آب می کنند. کاربردهای پروتئاز در صنایع دارویی، غذایی، لبنیات، چرم، مواد شوینده، نساجی و پزشکی استفاده از این آنزیم را موجه می سازد. در این تحقیق، ژن پروتئاز باکتری گرمادوست Cohnella sp. A01 جداسازی شده از استخر پرورش میگو در آبادان، در سیستم بیانی Escherichia coli همسانه سازی شد. ژن 507 جفت بازی پروتئاز 1147 Cohnella sp. A01 با استفاده از تکنیک PCR، تکثیر و پس از هضم آنزیمی با آنزیم های برشی NdeI و XhoI در پلاسمید بیانی pET-26b(+) همسانه سازی و سپس با روش شوک حرارتی به داخل سلول های E.coli DH5α ترنسفورم شد. وجود قطعه 507 جفت بازی با استفاده از آنزیم های برشی و PCR تائید شد. پلاسمید نوترکیب به منظور بیان ژن با استفاده از شوک حرارتی به داخل سلول های E.coli BL21 DE3 ترنفورم شد. بیان ژن پروتئاز 1147 با الکتروفورز SDS-PAGE بررسی و وزن مولکولی آنزیم نوترکیب معادل kDa 18 گزارش گردید. به دلیل وجود پروموتر قوی T7، بیان فراوان این آنزیم مشاهده گردید. نتایج نشان دهنده بیان هترولوگ آنزیم پروتئاز در سیستم بیانی E.coliبود.

Keywords:

همسانه سازی , بیان هترولوگ , پروتئاز مقاوم به حرارت , Cohnella sp. A01