تخلیص پپتید تری پاراتید(1-34 اسید آمینه)حاصل از هضم آنزیمی پروتئین امتزاجی نوترکیب حاوی آن

34 اسید آمینه ابتدایی هورمون پاراتیروئید دارای فعالیتی مشابه با هورمون پاراتورمون 84 اسید آمینهای است که به صورت نوترکیب تحت عنوان تریپاراتید تولید میشود. هدف از این تحقیق، یافتن شرایط مناسب مراحل مختلف تخلیص پپتید نوترکیب تریپاراتید(1-34 اسید آمینه) بیان شده توسط باکتری اشریشیاکلی بود. ژن این پروتئین استخراجی در وکتور pET-28 a همسان سازی شده بود. پپتید 34 اسید آمینه ای توسط یک لینکر که جایگاه برش آنزیم انتروکیناز بود به پایانه کربوکسیل بخش ممزوج شده، متصل شده بود. در این پژوهش تخریب سلول به روش شیمیایی به همراه سونیکاسیون انجام شد و بیش از 95 درصد پروتئینها وارد بخش محلول شدند. در مرحله بعد، پروتئین امتزاجی استخراج شده با استفاده از روش کروماتوگرافی تمایلی نیکل در شرایط واسرشته خالص سازی شد. پروتئینهای غیر اختصاصی با بافر شستشوی دارای pH برابر 6/3، از ستون خارج شدند و پروتئین امتزاجی نوترکیب با استفاده از بافر جداکننده با pH برابر 4/6 به صورت بهینه، خالص سازی شد. در مرحله بعد، با استفاده از آنزیم انتروکیناز با 0/25 درصد وزنی نسبت به پروتئین امتزاجی، بخش ممزوج شده به طور کامل از تریپاراتید 34 اسیدآمینهای جدا شد. در نهایت، با انجام کروماتوگرافی تعویض کاتیونی، پپتید 34 اسید آمینهای تخلیص شد که مقدار آن معادل 59/5 میلیگرم به ازای 100 میلی لیتر محیط کشت بود.

Keywords:

تریپاراتید , تخلیص , استخراج , کروماتوگرافی