ریز ازدیادی مو کشمشی (.Visit vinifera L) عاری از باکتری آگروباکتریوم در شرایط درون شیشه ای

انگور یکی از محصولات مهم باغبانی دنیا و ایران بوده و از لحاظ تنوع مصرف کم نظیر است و در ایران ارقام مختلفی از این گیاه کشت گردیده و موجب اشتغال زایی ویژه ای در زمینه کشاورزی و صنعت می گردد. این پژوهش به منظور تولید پایه های سالم و عاری از باکتری آگروباکتریوم از طریق کشت بافت جهت افزایش کمیت و کیفیت تولید انگور در کشور به اجرا در آمده است. به منظور سترون سازی ریزنمونه ها از سفید کننده تجاری در پنج غلظت مختلف (0، 5، 10، 15 و 20 درصد) به مدت 10 دقیقه و اتانول 70 درصد به مدت دو دقیقه استفاده گردید. به منظور کنترل آلودگی باکتریایی از آنتی بیوتیک سفوتاکسیم در چهار سطح (0، 100، 200 و 300 میلی گرم در لیتر) و اثر متقابل با آنتی بیوتیک تتراسایکلین در سه سطح (0، 50 و 100 میلی گرم در لیتر) استفاده شد. بعد از استقرار جوانه ها در محیط کشت MS ، تیمار های شاخه زایی هورمون BAP در چهار سطح (0، 5/0، 1 و 5/1 میلی گرم در لیتر) و اثر متقابل با هورمون IBA در سه سطح (0، 25/0 و 5/0 میلی گرم در لیتر) مورد بررسی قرار گرفتند. کلیه تیمار ها در محیط کشت MS تغییر یافته در سه تکرار و هر تکرار با سه ریز نمونه در آزمایش فاکتوریل در قالب طرح کاملا تصادفی کشت گردید. نتایج مقایسه میانگین داده های حاصل از تیمارهای کنترل آلودگی نشان داد که در غلظت 20 درصد سفید کننده تجاری، 70 درصد گیاه سالم و حداقل آلودگی وجود داشت. کمترین میزان آلودگی باکتریایی در محیط کشت حاوی 200 میلی گرم در لیتر سفوتاکسیم و 100 میلی گرم در لیتر تتراسایکلین حاصل شد. نتایج مقایسه میانگین داده ها نشان داد که بیشترین ضریب شاخه زایی (05/4) و رشد طولی شاخه (cm50/10) در تیمار 5/1 میلی گرم در لیتر BAP و 5/0 میلی گرم در لیتر IBA حاصل شد. همچنین بیشترین میزان ریشه زایی (95 درصد) در محیط کشت MS2/1 حاوی یک میلی گرم در لیتر IBA حاصل شد. جهت تشخیص پایه های سالم و عاری از آگروباکتریوم از روش مولکولی PCR استفاده شد. نتایج حاصل از PCR با پرایمر های اختصاصی نشان داد که در نمونه های حاصل از کشت بافت هیچ گونه باندی که حاکی از آلودگی به آگروباکتریوم باشد تکثیر نشد. در حالی که در کنترل مثبت و گیاهان آلوده به باکتری باند های مورد نظر تکثیر یافتند. واژه کلیدی: انگور کشمشی، تنظیم کننده های رشد، جوانه جانبی، شاخه زایی، آگروباکتریوم