امکان تولید تاسماهی شیپAcipenser nadiventris نر ماده زا با استفاده از تغییر جنسیت و القای ماده زایی
صاحب اثر: سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی
نوع محتوی: طرح پژوهشی
Language: Persian
استان موضوع گزارش: تهران
شهر موضوع گزارش: تهران
Document ID: R-1057773
Publish: 16 February 2019
دسته بندی علمی: علوم کشاورزی
View: 493
Pages: 15
Publish Year: 1391
نسخه کامل Research منتشر نشده است و در دسترس نیست.
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
Abstract:
در این تحقیق، امکان تولید تاسماهی شیپ ماده ژاینوژنتیک تغییر جنسیت یافته به نر بررسی شد. برای این منظور از مولد ماده شیپ و تاسماهی سیبری نر پرورشی موجود در انستیتو تحقیقات بین المللی ماهیان خاویاری دکتر دادمان استفاده شد. استحصال اسپرم و تخمک بر اساس روشهای مرسوم صورت گرفت. جهت تخریب DNA اسپرم با حفظ اثر تحریک تخمک، از اشعه 54-UV (UVG) استفاده شد. بدین منظور جداسازی مایع سمینال از اسپرم بمدت 5 دقیقه با سرعت 5000 دور در دقیقه سانتریفیوژ انجام و سپس در دمای 4 درجه سانتیگراد نگهداری گردید. مدت زمان تحرک اسپرم بررسی شد. ابتدا اسپرم %10 تهیه (1 میلی لیتر اسپرم به 9 میلی لیتر مایع سمینال) و با دوز ثابت 473 w/cm2 در فاصله 12 سانتی متری تحت تاثیر اشعه UV در فواصل زمانی ،0 ،60 ،90 ،180 120 و 210 ثانیه قرار گرفت. همچنین جهت تکمیل آزمایشات اشعه، اسپرمهای UV داده شده و شاهد با تخمک تاسماهی شیپ لقاح داده شده و نتایج آن بررسی گردید. بمنظور دیپلویید سازی و القای ژاینوژنزیز میوزی از شوک سرمایی 2/5 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه، 10 دقیقه بعد از ترکیب تخمک و اسپرم استفاده شد. 5 تیمار: ژاینوژن (اسپرم اشعه داده تاسماهی سیبری + تخمک ماهی شیپ + شوک سرمایی)، هاپلویید (اسپرم اشعه داده تاسماهی سیبری + تخمک ماهی شیپ بدون شوک سرمایی)، تریپلوییدی (اسپرم تاسماهی سیبری + تخمک ماهی شیپ + شوک سرمایی)، دورگه (اسپرم تاسماهی سیبری+ تخمک ماهی شیپ بدون شوک سرمایی) و تیمار شاهد (اسپرم ماهی شیپ + تخمک ماهی شیپ بدون شوک سرمایی) در نظر گرفته شد. جهت اثبات ژاینوژنزیز، از روش فنوتیپیک و ارزیابی ژنتیکی میکروستلایت با استفاده از پرایمرهای تاسماهی دریاچه ای بر روی لارو و بچه ماهیان انگشت قد تولیدی استفاده گردید. جهت تغییر جنسیت بچه ماهیان ژاینوژن جداسازی شده در سن 5 ماهگی و قبل از تمایز آناتومیک گنادی با استفاده از هورمون 17 - متیل تستوسترون (MT) شروع شد و تا 7 ماه ادامه یافت. برای این منظور سه تیمار: ژاینوژن شاهد (بدون هورمون)، تیمار 10 میلیگرم MT بر کیلوگرم غذا و تیمار 50 میلیگرم MT بر کیلوگرم غذا در نظر گرفته شد. بعد از هورمون تراپی با استفاده از لاپاراسکوپی و بیوپسی در سن 36-30 ماهگی نمونه برداری شد و جنسیت آنها به روش بافت شناسی گناد مورد بررسی قرار گرفت. بررسی آماری و تجزیه و تحلیل دادهها با استفاده از نرمافزار SPSS12 و Excel انجام شد. برای تعیین معنیدار بودن اختلاف بین پارامترها و مقایسه بین شاهد با تیمارها و همچنین بین تیمارهای مختلف از تجزیه واریانس یکطرفه (ANOVA) استفاده شد. از آزمون چند دامنهای توکی درصورتیکه اختلاف بین دادهها مشاهده میشد برای معنیدار بودن یا نبودن اختلاف در سطح %95 استفاده گردید. طبق نتایج بدست آمده بهترین مدت زمان اشعه دهی با لامپ UV برای اسپرم تاسماهی سیبری 60 ثانیه با شدت 473 w/cm2 بود که بالاترین درصد تحرک (%58) و لقاح (3/%68) را بعد از شاهد به خود اختصاص داد. میانگین درصد لقاح در تیمار ژاینوژن 86/66 درصد، در تیمار تریپلویید 91/86 درصد، در تیمار هاپلویید 68/66 و هیبرید 100 درصد ارزیابی گردید. میزان درصد لقاح در تیمار شاهد 96/3 درصد برآورد شد. میانگین درصد تفریخ تخم در گروه شاهد 92/4 درصد بود که این میزان در تیمار ژاینوژن 60/6 درصد تخمین زده شد. تفاوت معنی داری در درصد تفریخ تخم تیمار شاهد و تیمار ژاینوژن وجود داشت (05.0> P). میانگین درصد تفریخ تخم در تیمار تریپلویید 99/4 درصد بود که با تیمار شاهد اختلاف معنی داری داشت (05.0> P). میانگین درصد تفریخ تخم در تیمارهای هاپلویید و هیبرید بترتیب 2/1 و 52/5 درصد بود که با گروه شاهد و با همدیگر دارای اختلاف معنی داری بودند (05.0> P). تعداد لارو باقیمانده در تیمار هاپلویید دارای سندروم هاپلویید بودند و بصورت ناقص الخلقه تفریخ شدند که در فاصله کوتاهی بعد از تفریخ تلف شدند. در ارزیابی فنوتیپی ماهیان ژاینوژن و مقایسه آن با ماهیان دورگه (تاسماهی شیپ و تاسماهی سیبری ) مشخص گردید که تمامی دورگه ها غالبیت فنوتیپ خود را از مولد پدری یا تاسماهی سیبری به ارث برده اند ولی در تیمار ژاینوژن دیپلویید تمامی نمونه ها شبیه گونه مادری یا ماهی شیپ بودند. 3 مارکر (Afug،9 Afug،63 Afu68) از 5 مارکر میکروستلایت نشان داد که نتاج ژاینوژن دارای الگوی ژنومی مشابه با مولد مادری (تاسماهی شیپ) خود هستند و هیچگونه وراثت پذیری پدری در فرزندان ژاینوژن مشاهده نگردید. در بررسی بافت شناسی از گناد ماهیان ژاینوژن شاهد مشخص گردید که 3/%73 آنها ماده و 6/%26 نر می باشند. بنابراین ثابت گردید که سیستم تعیین جنسیت در ماهی شیپ هتروگامتی ماده (ZW) بوده و جنسیت ماده نقش تعیین کننده جنسیت فرزندان خود را دارد. در گروه تیماری با دوز 10 میلی گرم MT / کیلوگرم غذا، 50 % از گناد ماهیان از لحاظ فنوتیپی ظاهر بیضه را نشان می داد ولی ساختار گنادی ماده داشتند. همچنین 5 ماهی نر و 4 ماهی ماده و 9 ماهی با جنسیت بینابینی نیز در این گروه مشاهده شد. در گروه تیماری با دوز 50 میلی گرم MT / کیلوگرم غذا، تمامی ماهیان (%100) این گروه در مرحله 3 رسیدگی جنسی قرار داشته و جنسیت آنها با موفقیت به نر تغییر یافته بود ولی تا آن زمان فاقد اسپرم بودند. با توجه به اهمیت این تحقیق در تولید تاسماهی شیپ Neomale و امکان تولید نتاج تمام ماده با بازماندگی بالا در نسل بعدی و پاسخ به نیاز روزافزون پرورش دهندگان ماهیان خاویاری جهت دسترسی به بچه ماهیان خاویاری تمام ماده، حفظ ماهیان ژاینوژن تغییر جنسیت یافته به نر باقیمانده توصیه می شود. همچنین با تشخیص مکانیزم سیستم تعیین جنسیت در این ماهی می توان با دستکاریهای ژنتیکی ذخایر شدیدا در معرض خطر انقراض آن را احیا نمود و گامی موثر در ایجاد هر دو جنس نر