بررسی تکنیک جدا سازی و تراریخت کردن پروتوپلاست مزوفیل گیاه دارویی پروانش

در برگ های پروانش دایمر آلکالوئیدهای ایندول ترینوئید (TIAs) وین پلاستین و وین کریستین تجمع می یابند. اهمیت دارویی TIAs با توجه به فراوانی کم از آلکالوئیدهای ضد سرطان است. کلاس III پراکسیداز (11.1.7 .Prxs ,ECL) در گیاهان خاص و از خانواده بزرگ چند ژنی ها هستند آن ها آنزیم های چند منظوره که کاتالیزور اکسیداسیون از مولکول های کوچک را که باعث هدر دادن (H(2)O(2 شده و قادرند که طیف گسترده ای از سوبستراها را شناسایی کنند. (CroPrx(3 یک ژن جدید Prx است که در بیوسنتزهای آلکالوئیدهای ضد سرطان در پروانش دخالت دارد. cDNA های کامل به دست آمده برای CroPrx3-a و CroPrx3-b که به درون ناقل pGEM-Teasy کلون شدند. استقرار درون سلولی (CroPrx(3 ها به دستورالعمل تحقیقات بستگی دارد، تاکنون نشان داده شده است که پتانسیل های آن در طبیعت قابل دسترسی است که به عبارتی واکوئل TIAs نامیده می شود. به منظور دستیابی به موقعیت (CroPrx(3 در درون سلول از یک روش بیان موقت امتزاج های (GFP-CroPrx(3 در پروتوپلاست های مزوفیل پروانش توسعه داده شد. دو cDNA پریوش (Crmecs ،Crdxr) آنزیم های رمز کننده در مسیر بدون ترپنوئید موالات که شناسایی و در استراتژی RT-PCR که براساس طراحی الیگونوکلئوتیدهای دژنره استفاده شدند. استنباط توالی اسید آمینه از Crdxr، همولوگ به 1-دی اکسی -D- زایلوز 5 فسفات ردکتوایزومراز است. Crmecs نشان دهنده رمز گذاری اولین cDNA گیاه یک پروتئین شبیه 2C- متیل- دری تری تول 2، 4 دی سیکلو فسفات سنتاز از کلی باسیل است. بیان ژن های Crdxr و Crmecs بصورت بالا تنظیم در سلول های پریوش که آلکالوئید های ایندول منوترپنوئید تولید می کنند. دخالت در مسیر 2C- متیل- دری تری تول، 4-فسفات در بیوسنتز آلکالوئیدها بررسی شده است. بیان موقت امتزاج های (GFP-CroPrx(3 که یک استقرار واکوئلی برای این آنزیم و عمل مرتب سازی واکوئل برای CroPrx3-CTE را نشان داد. در حالی که برای انباشته شدن فلورسانس سبز در واکوئل مرکزی پرتوپلاست های مزوفیل پریوش حضور در این نقاط کافی و ضروری است. بررسی استقرار درون سلولی پروتئین های منظم شده بهوسیله ژن کاندید که می تواند کارآمد باشد بوسیله یک استراتژی که امتزاج های با طراحی دقیق همراه با پروتئین های فلورسنت (Fps) که بوسیله بیان موقت دنبال می شوند. در حقیقت، یک ابزار بسیار مفید برای توصیف ژن کاندید، در حال حاضر به طور مداوم ناشی از امیک و دستاوردهای سیلیکو است، استفاده از روش بیان موقت در بررسی استقرار درون سلولی، تعامل پروتئین- پروتئین و برای سنجش عملکردهای متنوع مانند فعالیت های آنزیمی، حمل و نقل و غیره است. این روش به ویژه برای آنهایی کهارگانیسم همولوگ که در این روش انجام می شود توسعه یافته است، در اینجا روش سریع و آسان برای بیان موقت در گیاه دارویی مهم پروانش و دستیابی به روش های توسعه یافته تر برای تحقیقات آینده است. علاوه بر این انتقال وتطبیق روش های توسعه یافته به سایر گونه های مورد علاقه باید امکان پذیر و تشویق گردد.