بیان موفق و بالای پروتئین های نوترکیب انسانی در کلروپلاست، مطالعه موردی: پروتئین فعالکننده پلاسمینوژن بافتی (tPA)
Publish place: 12th Congress of Iranian Genetics Society
Publish Year: 1393
نوع سند: مقاله کنفرانسی
زبان: Persian
View: 1,000
This Paper With 7 Page And PDF Format Ready To Download
- Certificate
- من نویسنده این مقاله هستم
این Paper در بخشهای موضوعی زیر دسته بندی شده است:
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
CIGS13_0268
تاریخ نمایه سازی: 7 بهمن 1393
Abstract:
با شناخت کلروپلاست به عنوان یک اندامک ارزشمند در انتقال ژن، بر بسیاری از مشکلات مربوط به تراریختی هسته گیاه از جمله مسائل مرتبط باایمنی زیستی محصولات تراریخت غلبه شد. در این مقاله ضمن بر شمردن خصوصیات منحصر بفرد کلروپلاست در تولید پروتئین های نوترکیب انسانی مختلف، به قابلیت این اندامک در بیان پروتئینtPAفعال کننده پلاسمینوژن بافتی اشاره خواهد شد. پروتئین انسانیTPAفعال کننده پلاسمینوژن بافتی نوترکیب یکی از مهمترین پروتئینهای نوترکیب داروئی است که به منظور از بین بردن لخته خون در بخشهای مختلف بدن از جمله رگهای خونرسان به قلب و مغز استفاده میشود. به منظور انتقال ژنK2Sفرم اصلاح شده پلاسمینوژن بافتی) به کلروپلاست گیاه توتونcDNAمربوطه ابتدا در ناقلpTZ57R/Tدرج و پس از برش آنزیمی در ناقل کلروپلاستیpKCZخاص گیاه توتون درج و در باکتریE.coliسویهDH5αهمسانهسازی شد. جهت تسهیل تخلیص محصول پروتئین تولیدی از طریق کروماتوگرافی، توالی شش هیستیدین و توالی پروتئازی فاکتورXaبه انتهای آمینی ژنK2Sالحاق یافت. ناقل حامل ژن هدف با استفاده از روش زیستپرتابی، به ریزنمونههای برگی شلیک شدپس از انتقال ریزنمونههای به محیط گزینشگر حاوی آنتی بیوتیک اسپکتینومایسین، جوانههای تراریخته باززایی، به منظور رسیدن به هموپلاسمی زیرکشتهای متعدد و حداقل سه دوره باززایی نوساقه در حضور آنتیبیوتیک گزینشگر انجام شد. حضور و تلفیق تراژنK2Sدر گیاهان ترانس پلاستومیک با آنالیزPCRو هموپلاسمی به کمک کاوشگرهای طراحی شده و آزمون دورگهسازی به روش سادرن به تایید رسید. ارزیابی بیان ژن هدفK2Sو میزان پروتئین تولیدی با آنالیزSDS-PAGE ،RT-PCRلکهگذاری نقطهای، وسترنبلات و الایزا انجام شد. فعال بودن پروتئین تولید شده در گیاهان تراریخته با آزمون زیموگرام تایید شد. بذور گیاهان تراریخت به منظور اطمینان از انتقال ژن به نسل بعد، کشت و گیاهان نسلT1از نظر حضور، بیان ژنtPAمورد ارزیابی قرار گرفتند. نتایج این تحقیق مبین انتقال و بیان موفق ژنtPAو حضور پروتئین در شکل فعال در گیاهانتراریخت و انتقال موفق ژنTPA درنسل T1است. نتایج نشان داد اندامک کلروپلاست به عنوان یک بیوراکتور طبیعی از پتانسیل خوبی جهت بیان TPA برخوردار است
Keywords:
Authors
مریم عبدلی نسب
دانشگاه تحصیلات تکمیلی صنعتی و فناوری پیشرفته کرمان، پژوهشکده علوم محیطی، گروه بیوتکنولوژی دانشگاه تربیت مدرس، دانشکده کشاورزی، گروه اص
مختار جلالی جواران
دانشگاه تربیت مدرس، دانشکده کشاورزی، گروه اصلاح نباتات و بیوتکنولوژی
هوشنگ علیزاده
دانشگاه تهران، دانشکده علوم کشاورزی، گروه اصلاح نباتات
ارسلان رضایی
دانشگاه تربیت مدرس، دانشکده کشاورزی، گروه اصلاح نباتات و بیوتکنولوژی
مراجع و منابع این Paper:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این Paper را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود Paper لینک شده اند :