جداسازی و تکثیر فاژهای پلی کلونال اختصاصی ویروس تریستزای مرکبات از کتابخانه فاژی

ویروس تریستزا یکی از مخرب ترین و از نظر اقتصادی مهم ترین عوامل بیماری زای مرکبات در دنیا به شمار می رود.از آنجا که این ویروس در بیشتر مناطق مرکبات خیز ایران گزارش شده است، لزوم مدیریت این بیماری برای حفظ محصول اجتناب ناپذیر است. روش های جدید کنترل بیماری با استفاده ازمهندسی ژنتیک موفقیت های چشمگیری در این زمینه داشته است، ازجمله این روش ها ایجاد مقاومت با استفاده از آنتی بادی های نوترکیب می باشد. یکی ازمهم ترین موانع در استفاده از این راهکار، دسترسی به ژن های آنتی بادی اختصاصی می باشد. در این تحقیق با استفاده از بررسی کتابخانه فاژی، رسیدن به این ژن ها ممکن گردید. برای استخراج آنتی بادی های نوترکیب اختصاصی علیه ویروس تریستزادراین تحقیق ابتدا ژن کدکننده پروتئین ویروسی ازگیاهان آلوده جداسازی و همسانه سازی شد و پروتئین مورد نظردر باکتری E.coli بیان شد و بعد از خالص سازی به روش کروماتوگرافی میل ترکیبی با استفاده از تکنولوژی نمایش فاژی، فاژهای کتابخانه با استفاده از پروتئین نوترکیب به روش پنینگ(روشی جهت غربال کردن کتاب خانه فاژی موجود برای دستیابی به فاژهای حامل قطعه ژن آنتی بادی مورد نظر) غربال شدند و در مراحل متوالی تکثیر و غربالگری کتابخانه صورت گرفت. جهت تایید اختصاصیت فاژهای پلی کلونال از آزمون الیزا استفاده شد و نتایج نشان داد که فاژهای جداشده اختصاصیت بالایی در اتصال به پروتئین نوترکیب دارند و در دورهای متوالی پنینگ کتابخانه اختصاصیت فاژها افزوده شد، از این فاژها جهت تولید آنتی بادی منوکلونال می توان استفاده نمود.

Keywords:

نمایش فاژی , ویروس تریستزای مرکبات , پلی کلونال