تهیه کتابخانه فاژمیدی VHH بز علیه فاکتور رشد اندوتلیال رگی (VEGF ) و انتخاب VHH های اختصاصی علیه آن

فاکتور رشد اندوتلیال رگی (VEGF) دارای نقشهای پر اهمیتی درآنژیوژنز (تشکیل رگهای خونی جدید ) در تومور سرطانی بوده و بنابراین مولکول هدف مناسبی برای درمان متاستاز سرطان می باشد . VHH (نانو بادی) ، دارای مزیتهای فراوانی برای درمان بیماریها می باشد . در این پروژه ابتدا یک کتابخانه فاژی بر علیه ناحیه اتصال به آنتی ژن VEGF-a ساخته شده و آنگاه نانو بادیهای دارای بیشترین تمایل اتصال به آنتی ژن از کتابخانه جدا شدند . روش: ناخیه اتصال به آنتی ژن VEGF-a به عنوان ایمنونوژن به شتر تزریق شد . پس از ایمن شدن شترها و تهیه لنفوسیت ،واکنش RT-PCR و nested PCR برای به دست آوردن VHH اجرا شد. قطعات VHH حاصل برای ساخت کتابخانه فاژی استفاده گردیدند . پس از رهاسازی فاژها و انجام مراحل غنی سازی، بهترین مرحله غنی سازی با استفاده از الایزا پلی کلونال فاژی انتخاب شده و تک کلونهای مناسب با یک تست الایزای مجدد جدا شدند . نتیجه تحقیق : پس از نهیه لنفوسیت و به دست آوردن RNA و cDNA، کتابخانه فاژی با موفقیت ساخته شده و چهار مرحله غنی سازی انجام شد . در تست فاژ الایزا مرحله سوم غنی سازی دااری بالاترین OD بوده و تک کلونها از این مرحله انتخاب گردیند .

Keywords:

فاکتور ردش اندوتلیال رگی , نانو بادی , کتابخانه فاژی , غنی سازی