استفاده از روش تراریزش توام برای انتقال ژن کولین اکسیداز به برنج

در این پژوهش به منظور تولید گیاه برنج تراریخته با ژن کولین اکسیداز با قابلیت حذف ژننشانگر انتخابی، دو پلاسمید بیانی موسوم به pABRII-Chl(ژن کولین اکسیداز حاوی پپتیدراهنما برای تظاهر ژن در کلروپلاست) و pABRII-Cyt(بدون پپتید راهنما برای تظاهر درسیتوپلاست) ساخته شد و سپس با استفاده از روش تراریزش توام ،1به همراه پلاسمید pTRA132حامل ژن مقاومت به هیگرومایسین ،(hph)به کالوسهای جنین زایی که از ناحیه اسکوتلوم بذوررسیده رقم هاشمی منشا گرفته بودند، به روش ریزپرتابی منتقل شدند. سلول های تراریختهاحتمالی از بافت های بمباران شده پس از 3دوره گزینش در محیط کالوسزای N6حاویهیگرومایسین ب گزینش شدند. به صورتی که غلظت آنتی بیوتیک از 60میلیگرم در لیتر به 80میلی گرم در لیتر افزایش یافت. در نهایت کالوسهای مقاوم به هیگرومایسین، در محیط باززایی MSحاوی هیگرومایسین باززا شدند. صورتی که غلظت آنتی بیوتیک از 80میلیگرم در لیتر به 60میلی گرم در لیتر کاهش یافت. گیاهان برنج تراریخته ی احتمالی به روش آنالیز زنجیرهایپلیمراز، آنالیز سادرن و RT-PCRمورد بررسی قرار گرفتند و حضور ژن و بروز آن مورد تاییدقرار گرفت. فراوانی قابل قبول گیاهان تراریخته حاصل از روش تراریزش همزمان در اینپژوهش نشان داد که روش مورد استفاده یک روش تکرار پذیر و نسبتا کارا برای انتقال پایدارژن های مفید و تولید گیاهان تراریخته عاری از ژن انتخابگر در مقیاس وسیع است. انتقال ژنمقاومت به آنتی بیوتیک در ساختار جداگانه امکان جداسازی این ژن از محصول نهایی را درنتیجه تفرق فراهم میآورد که از جنبه ایمنی زیستی حایز اهمیت است

Keywords:

برنج رقم هاشمی , ترتریزش توام , ریزپرتابهhph ژنکولین اکسیدازگلایسینبتایین