Partial purification of Glutathione S transferase from GAMMARUS species of the Caspian Sea using ammonium sulfate precipitation

گلوتاتیون S ترانسفراز (GST) یک آنزیم چند عملکردی است که تصور می شود در شروع فرایند سم زدایی از ترکیبات فعال دارویی نقش فیزیولوژیکی دارد. این آنزیم واکنش میان ترکیبات گزنوبیوتیک و گروه S-H را کاتالیز می کنند. این واکنش اتصالی منجر به کاهش فعالیت بیولوژیکی و افزایش حلالیت ترکیب می شود؛ به گونه ای که ترکیبات حاصل به صورت متصل به گروه تیول، قطبی تر هستند و در نتیجه حذف آنها راحت تر است. فعالیت این آنزیم در گروه بزرگی از گونه های بی مهره بررسی شده است که نشان دهنده وجود ارتباط بین فعالیت آنزیم GST و تحمل این ارگانیسم ها نسبت به ترکیبات خارجی است. گاماروس از جمله بی مهرگانی است که به طیف گسترده ای از آلاینده ها حساس هستند و برای تشخیص آلاینده های محیطی مناسب می باشند، به همین دلیل معمولا به عنوان ارگانیسم مدل در مطالعات آلودگی های محیط زیست استفاده می شوند.خالص سازی نسبی آنزیم GST هدف اصلی این مطالعه بوده است. به منظور کاهش حجم،افزایش غلظت و خالص سازی پروتیین ها روش های رسوب گذاری مختلفی می تواند مورد استفاده قرار گیرد. با غلظت های مناسب از نمک آمونیوم سولفات،پروتیین ها با حلالیت مختلف از یکدیگر جدا می شوند. در مطالعه ما نمک آمونیوم سولفات با غلظت نهایی 60% و 90% به هموژن گاماروس افزوده شد. محلول حاصل با دور xg12000 سانتریفیوژ شد. سپس محلول رویی (supernatant) در 4 درجه سانتیگراد در بافر فسفات (100mM,PH=7) حاوی 15/0 میلی مولار نمک NaCl به مدت یک شب دیالیز شد. غلظت پروتیین به روش برادفورد اندازه گیری و فعالیت آنزیم GST به روش Habig سنجیده شد. مقدار پروتیین در غلظت 60% و 90% کاهش یافت؛ فعالیت آنزیم در 90% کاهش 3 درصدی داشت اما در مقایسه با آن، در محلول اشباع 60% یک افزایش 4 برابری در میزان فعالیت آنزیم مشاهده شد.در نتیجه، یافته های موجود رسوب با آمونیوم سولفات را به عنوان یک روش برای تغلیظ و تخلیص آنزیم پیشنهاد می کند.

Keywords:

گاماروس , گلوتاتیون S ترانسفراز , رسوب با آمونیوم سولفات , خالص سازی