بررسی ساختار فراریزبینی و مولکولی‭PCR-RFLP)) ‬گونه های سارکوسیستیس در شتر و بز

سارکوسیستوزیس توسط گونه های مختلف انگل تک یاخته داخل سلولی بنام سارکوسیستیس ایجاد می گردد که در شاخه ‭Apicomplexa ‬قرار دارد. سارکوسیستیس یکی از شایع ترین انگل های تک یاخته ای حیوانات در جهان محسوب می شود. برای تکمیل چرخه زندگی از دو میزبان واسط و اصلی کمک می گیرد. انسان به عنوان هر دو میزبان در چرخه زندگی قرار دارد. در نتیجه این انگل از نظر دامپزشکی و پزشکی ( زیونوز ) دارای اهمیت می باشد. این مطالعه با هدف شناسایی میکروکیست و ماکروکیست گونه های سارکوسیستیس در اندام های مورد نظر شتر و بزهای ذبح شده در کشتارگاه با استفاده از روشهای میکروسکوپ الکترونی و ‭- RFLP PCR ‬انجام گرفت. نمونه های بافتی جمع آوری شده و بکمک روش های مهری و هضمی، آلوده و غیرآلوده بودن آنها تاییدگردید. نمونه های مثبت در ظرف حاوی سرم فیزیولوژی شسته و برای بررسی ساختار فراریزبینی دیواره کیست ها؛ آنها را در گلوتارآلدیید %4 و جهت بررسی ملکولی تا زمان استفاده در دمای ‮‭20‬- قرار داده شدند. در این بررسی دو نوع ماکروکیست بزرگ و کوچک در بز و یک نوع میکروکیست در شتر مشاهده شد. از شتر فقط میکروکیست هایی سفید رنگ، دوکی شکل در اندازه های ‮‭260 75‬‭x ‬میکرومترجدا گردید. با توجه به خصوصیات فراریزبینی دیواره کیست ها گونه مذکور سارکوسیستیس کملی تشخیص داده شد. در بز دو نوع ماکروکیست: 1- باریک ،کوچک واستوانه ا ی در اندازه های ‮‭1-3‬ میلیمتر و 2- ضخیم، بزرگ وبیضی شکل تا گرد با اندازه های ‮‭6-10‬ میلیمتر دیده شدند. با توجه به ساختار دیواره ای هر دو کیست از یک نوع سارکوسیستیس مولی تشخیص داده شدند. استخراج ‭DNA ‬با روش معمول فنل - کلروفرم انجام گرفت. پرایمرهای لازم بکمک سکانس های مربوط به سایر حیوانات موجود دربانک ژن طراحی شدند. قطعه ژنومی ‮‭18‬‭SrRNA ‬تکثیر شد. نتایج الکتروفورز محصولات ‭PCR‬، قطعه ای تقریبا با ‮‭600‬ جفت باز را نشان داد. محصولات بدست آمده کلون و تعیین سکانس گردیدند.سپس با روش هضمی آنزیم های لازم بر روی آن ها اثر داده شدند. با وجودی که بیش از ‮‭150‬ گونه سارکوسیست شرح داده شده است اما اطلاعات در باره جزییات ساختمان فراریزبینی دیواره کیست اندک است. این مطالعه نیز همانند اکثر گزارشات قبل نشان می دهد که شتر فقط به میکروکیست آلوده می شود و همگی یک گونه می باشند. با توجه به اینکه ماکروکیستها در بز به خوبی توصیف نشده اند و در باره متفاوت بودن آنها اختلاف نظر وجود دارد. در این مطالعه علت اختلافات در دو نوع کیست، زمان رشد آنها در نظر گرفته شده است. اگرچه تحقیقات بیشتری در این مورد ضروری به نظر می رسد. تجزیه و تحلیل سکانس های بدست آمده نشان میدهد که اولا‭PCR ‬روشی راحت و سریع است و برای تفکیک گونه های سارکوسیستیس در میزبان های متفاوت مناسب می باشد. ثانیا شتر فقط به میکروکیست آلوده می گردد و همگی از یک گونه می باشند. اطلاعات بدست آمده از سارکوسیستیس در شتر اولین گزارش بررسی ملکولی این انگل در این حیوان می باشد ‭( Accession No.GU‬‮‭074011‬ ) . در بز با توجه به سکانس های به دست آمده تشابه کیست های کوچک و بزرگ با سارکوسیستیس مولی نزدیک تر است. اگرچه اختلاف ساختاری آنها نیاز به مطالعه بیشتری دارد. کلمات کلیدی: سارکوسیستیس، ‭Apicomplexa ‬، بز، شتر، ‭PCR- RFLP ‬، فراریزبینی