جداسازی و شناسایی مولکولی ویروس ‭PPR ‬از کانون های آلوده ایران

تعداد ‮‭168‬ نمونه شامل خون کامل، سواب چشمی، سواب بینی، سواب دهانی و عقده های لنفاوی از گوسفندان و بزهای دارای علایم بالینی ‭PPR ‬و بر اساس گزارشات کانون های بیماری توسط سازمان دامپزشکی و اعزام سریع به محل گوسفند داریهای استانهای قم، فارس، اردبیل، قزوین، آذربایجان شرقی، آذربایجان غربی، لرستان، تهران و کرمان تهیه و تحت شرایط استاندارد به آزمایشگاه ویروس شناسی حمل و پس از آماده سازی بر روی تیره سلولی ‭Vero ‬و سلول پرایمری ‭LK ‬تلقیح و هر نمونه برای مدت ‮‭14‬ روز از نظر ضایعات سلولی بررسی و در صورت عدم مشاهده ضایعه سلولی ‭(CPE) ‬این کار حداقل برای 3 پاساژ کور ادامه می یافت. از موارد مثبت سلولهای ضایعه دیده در هر پاساژ ممکنه، نمونه هایی جهت استخراج ‭RNA ‬ویروسی و انجام ‭RT-PCR ‬آماده گردید. همچنین از موارد مثبت، پس از تهیه گرید و رنگ آمیزی منفی با فسفو تنگستیک اسید %2 ، نمونه هایی برای مشاهده اجرام ویروسی در زیر میکروسکوپ الکترونی آماده گردید. در مجموع، در موارد متعددی در نمونه ها و پاساژهای مختلف ‭CPE ‬مشاهده گردید که در یک نمونه از آنها در زیر میکروسکوپ الکترونی اجرام ویروسی در اندازه های ‮‭150-300‬ نانومتر مشاهده شد که از نظر شکل ظاهری و اندازه شبیه پارامیکسوویروس ها بود. در دو مورد مربوط به نمونه های خون کامل و عقده لنفاوی گوسفندان استان های آذربایجان شرقی و کرمان علاوه بر مشاهده ‭CPE ‬در سلولهای ‭Vero ‬و ‭LK ‬، نتیجه ‭PCR ‬آنها مثبت بود ولی با تکرار کشت سلولی و انجام روش مولکولار به مرور زمان نتیجه ‭PCR ‬متغیر گردید. با ارسال نمونه هایی برای کشت مایکوپلاسما از نظر مایکوپلاسما مثبت اعلام گردید. با اقدام به استفاده از آنتی بیوتیک های مختلف جهت از بین بردن مایکوپلاسما و سپس تلقیح نمونه بر روی کشت های سلولی و نهایتا انجام مجدد ‭PCR ‬اقدام درمانی موثر نبود. در استفاده از داروهای اختصاصی مایکوپلاسما حتی در دزهای بالا نیز رشد مایکوپلاسما متوقف نگردید. با کشت مایکوپلاسما و تعیین جنس و گونه آن،‭Mycoplasma salivarium ‬و ‭Mycoplasma orale ‬مشخص گردید. با وجود اینکه این دو گونه، از مایکوپلاسماهای غیر بیماریزا در محوطه دهانی انسان می باشند که در مواردی بیماریزا می شوند ولی در حیواناتی نظیر اسب، خوک، گوسفند و بز نیز جدا شده اند. با توجه به اینکه این دو گونه در کشت های سلولی ‭Non Cytopathic ‬هستند، ولی باعث توقف رشد ویروس های تلقیح شده به سلول ها می شوند. بنابر این ضایعات سلولی ایجاد شده، ناشی از حضور ویروس می باشد. با انجام آنتی بیوگرام و تعیین بهترین آنتی بیوتیک های موثر امید این می رود که شاید بتوان از تیتر مایکوپلاسماها به میزان قابل توجهی کاست و یا حتی آنها را از بین برد. که در این صورت ویروس می تواند در آزمایش های مولکولار باندهای مثبت دایمی ایجاد نماید.