بررسی و پژوهش در کاربرد ماده ضدکف (آنتی فوم) برای تهیه واکسن های میکروبی بی هوازی

بخش تحقیق و تهیه واکسنهای بی هوازی در موسسه رازی مسیولیت تهیه شش نوع مختلف واکسن بر ضد بیماریهای ناشی از میکروبهای بی هوازی را به شرح زیر به عهده دارد : 1- واکسن ضد اسهال عفونی بره های نوزاد که عامل کلستریدیوم پرفرنژنسی گونه ‭B ‬می باشد. 2- واکسن انتراک یا آنتروتوکسمی گوسفندان جوان که عامل آن کلستریدیوم پرفرنژنسی گونه ‭C ‬می باشد . 3- واکسن انتروتوکسمی بره گوسفندهای بالغ که عامل آن کلستریدیوم پرفرنژنسی گونه ‭D ‬می باشد . 4- واکسن براکسی گوسفند که عامل آن کلستریدیوم سپتیکوم است. 5- واکسن قانقاریای کبد گوسفند که عامل آن کلستریدیوم ادماسین گونه ‭B ‬می باشد. 6- شاربن علامتی گاو و گوساله که عامل آن کلستریدیوم شوویی است. بعضی از میکروبهای بی هوازی که برای تهیه واکسنهای شماره 1و 2و 3 در حجم زیاد (‮‭640‬ لیتر محیط کشت درهر سری ) بکار می روند هنگام رشد وسنتز زهرابه های گوناگون ، تولید مقادیر زیادی گاز های مختلف مانند 2 ‭CO ‬،2 ‭NH‬،3 ‭SH ‬می نمایند . تراکم زیاد این گازها موجب خارج شدن آنها از شیشه های کشت میکروبی و سبب آلودگی محیط اطراف در گرمخانه می شود ومشکلات عدیده دیگری به وجود می آورند ، بنابراین ضروری است که پژوهشهایی درباره چگونگی رفع این مشکل به عمل آید که آزمایشگاه مسیول تهیه این نوع واکسنها به تواند واکسنهای مورد نیاز را که به مقدار زیاد مورد درخواست برای مبارزه با بیماری های ناشی از میکروبهای بی هوازی می باشد تهیه و تولید نماید. هدف : تعیین میزان دقیق ضد کف ( آنتی فوم ) برای خنثی و جلوگیری از خروج گازهاییکه در اثر رشد و تکثیر گروه میکروب کلستریدیوم پرفرنژنس در محیط های کشت میکروبی که برای تهیه واکسن ضد آنتروتوکسمی به کار می روند می باشد . اهمیت اجرای طرح : از طرف سازمان دامپزشکی کشور مقدار درخواست واکسن ضدآنتروتوکسمی بالغ بر چهل میلیون واحد در سال که حجم آن حدود یکصد و شصت هزار لیتر می شود می باشد . تهیه انواع این واکسنها در طول سال ادامه داشته و در صورتیکه برای تولید آنها هر روز مقادیری گاز به علت رشد و تکثیر میکروبها از شیشه های واکسن خارج گردد مشکلاتی را به شرح زیر ایجاد می نماید. 1- گازهای خارج شده از شیشه ها که آلوده به میکروب کلستریدیوم پرفرنژنس می باشد موجب آلودگی محیط اطراف می گردد. 2- به منظور عفونی این آلودگی که در حجم زیاد می باشد موجب اتلاف وقت و صرف مواد ضد عفونی برای نظافت آنها . 3- با توجه به اینکه بعضی از این میکروبها عامل بیماری قانقاریای گازدار در انسان می باشند خطراتی برای کارمندان که برای تولید و تهیه این نوع واکسنها کار می نمایند ایجاد می کند . 4- مقادیری از محیط کشت همراه با گاز از شیشه ها خارج می گردد که از نظر اقتصادی زیان آور است . بنابراین تحقیق پژوهش برای جلوگیری از خارج شدن این گازها به منظور تهیه و تولید این واکسنها حایز اهمیت می باشد . سابقه تحقیق : پزوهش های مقدماتی برای این منظور در بخش تحقیق وتهیه واکسنهای بی هوازی انجام گردیده که کامل نمی باشد ونیاز به مطالعه و برنامه ریزی دارد . همچنین تحقیقاتی در این مورد در خارج انجام گردیده که از انتشارات مربوطه استفاده می گردد. روش تحقیق : برای تهیه و تولید هر نوع از واکسنهای شماره 1و2و 3 که هر سری آن حاوی حدود ‮‭640‬ لیتر محیط کشت میکروبی می باشد بعد از اتوکلاو و قبل از اضافه نمود بذر میکروب از ماده ضد کف (آنتی فوم ) استفاده می گردد .ضد کف مورد نظر سیلیکون ‭Silicone ‬می باشد . ابتدا رقت های مختلفی از ماده ضد کف برای چند شیشه از هر سری محیط کشت میکروبی تهیه و به شیشه های محتوی نمک های معدنی و ویتامین بطور جداگانه اضافه و سپس بذر میکروب مورد نظر که کلستریدیوم پرفرنژنس گونه های و و می باشد شیشه های حاوی محیط کشت اضافه می نماییم .لازم به ذکر است که گازهای تولید شده بستگی به نوع میکروب های ذکر شده دارد و نسبت تولید گاز در آنها متفاوت است . در این بررسی ضروری است که مقدار اپتیمم‭( Optimum) ‬ضد کف برای هر نوع محیط کشت که برای تهیه واکسن به کار می رود دقیقا مشخص گردد . اثر اضافه نمودن مقدار زیاد آنتی فوم در عیار زهرابه ها می بایستی بررسی گردد . پس از اتمام رشد هر نوع میکروب نمونه برداری از شیشه هاییکه آنتی فوم به آنها اضافه گردیده انجام می شود ابتدا نمونه را سانتریفوژ نموده و مایع رو که حاوی زهرابه می باشد با تهیه رقت های مختلف قدرت عیار هر نوع زهرابه در موش سفید ‮‭18 -20‬ گروه تعیین می شود در این آزمایش ها کوشش خواهد شد از کلسترین مقدار آنتی فوم استفاده گردد تا میزانیکه قادر به جلوگیری از خارج شدن گاز در شیشه های محتوی محیط کشت باشد و ضمنا اثری در پایین آور شدن عیار زهرابه ها نداشته باشد پس از تعیین مقدار اپتیمم آنتی فوم و استفاده از آن در تهیه واکسن از واکسنهای تهیه شده با آنتی فوم عیار پادتن ها روش استانداردهای بین المللی در دامهای آزمایشگاهی ( خرگوش ) تعیین می گردد.