مقایسه روشهای استخراج DNA در گیاه دارویی Peganum harmala L.

شناسایی ویژگیهای ژنتیکی، مورفولوژیکی و اکولوژیکی گیاهان برای بهره برداری اقتصادی و بهدا شتی از محصولات گیاهی ضروری ا ست که ا ستخراج DNA با کیفیت یکی از راه های آن است. اما، استخراج DNA باکیفیت خوب و بازده بالا به دلیل وجود دیواره سلولی پلی ساکاریدی سخت، حضور رنگدانه ها و وجود برخی متابولیتهای ثانویه از بافتهای گیاهی کار سختی است. گفتنی است که در گیاهان دارویی متابولیتهای ثانویه که معمولا موجب خواص دارویی آنها می شوند، ممکن است مانع استخراج DNA با کیفیت و کمیت مناسب هم بشوند. گرچه، اساس استخراج DNA یکسان است، به خاطر تنوع ترکیبات بافتهای گونه های مختلف گیاهی، نمیتوان روش یکسانی را برای استخراج DNA از همه گونه های گیاهی به کار گرفت. روشی بیشتر دلخواه است که نه تنها DNAای مناسب از نظر کمی و کیفی به دست بدهد، بلکه با هزینه پایین و بدون نیاز به تجهیزات پیشرفته آزمایشگاهی انجام شود. در این مطالعه، پنج روش استخراج شامل CTAB اصلی (Doyl & Doyl)، دو روش تغییریافته آن، روش تغییر یافته موری و تامپسون و کیت تجاری Gene All برای استخراج DNA از برگ تازه و خشک گیاه اسفند (Peganum harmala L.) مقایسه شدند. کمیت و کیفیت DNAهای جداسازی شده با ا ستفاده از ا سپکتروفتومتری و الکتروفورز ژل آگارز ارزیابی شدند. مناسب بودن DNAهای بهد ست آمده برای مطالعات ملکولی با ا ستفاده از انجام PCR قطعات ITS در DNA ریبوزومی هستهای و ناحیهtrnL-F در ژنوم کلروپلاستی بررسی شد. براساس یافته ها، ایجاد تغییرات در روش CTAB اصلی، از جمله حذف بتامرکاپتواتانول یا استات آمونیوم بر کمیت و یا کیفیت DNA استخراجی و یا نتایج PCR اثر منفی نداشت. PCR قطعات ITS و ناحیه trnL-F در همه DNAهای به دست آمده از برگ تازه و خشک گیاه اسفند با موفقیت انجام شد. بنابراین، درمورد گیاه اسفند میتوان از همه روشهای بررسی شده DNA مناسب برای PCR استخراج نمود.

Keywords:

PCR , CTAB , موری و تامپسون , متابولیت ثانویه , اسفند