هدف قرار دادن لکوس TRAC در رده های سلولی T به وسیله CRISPR-Cpf۱

درمان با سلولهای T مهندسی ژنتیکی شده تاکنون برای انواع مختلفی از سرطانها به کارگرفته شده و پتانسیلهای درمانی قابل توجهی را، هم برای تومورهای سخت و هم برای انواع سرطانهای خون، نشان داده است. با این حال، وجود TCRهای اندوژن روی سطح سلولهای T مهندسی شده، استفاده از این درمانها به صورت آلوژن را با چالش ایجاد GVHD (بیماری پیوند علیه میزبان) روبرو کرده است، که در آن TCRهای اندوژن موجود در سطح سلولهای T مهندسی شده علیه بافتهای فرد گیرنده واکنش نشان میدهند. از آنجا که ایجاد کننده این واکنش آلوژن، TCR موجود در سطح سلولهای T مهندسی شده میباشد، جلوگیری از بیان کاربردی TCR در سطح این سلولها در رفع این چالش موثر است. در این پژوهش، ما به ارزیابی کاربرد سامانه ویرایش ژنی CRISPER/Cpf۱ برای از کار انداختن زیرواحد آلفای TCR در یک رده سلول T موسوم به سلولهای Jurkat پرداختیم. در ابتدا سه crRNA برای هدف گرفتن لکوس TRAC که ناحیه ثابت TCR را کد میکند طراحی و ساخته شد. کارایی این سامانه در دو سطح توالی ژنومی و بیان پروتئین به ترتیب با روشهای آنالیز توالی DNA و فلو سایتومتری برر سی شد. نتایج ن شان دادند که دو crRNA از بین سه crRNA طراحی شده علیه لکوس TRAC، حذفهایی در ژنوم ناحیه ثابت TCR ایجاد کردند که مانع از بیان کاربردی TCR روی سطح سلول میگردد. این یافته ها نشان میدهد که CRISPER/Cpf۱ سیستم ویرایش ژنی مناسبی در راستای حذف بیان کاربردی TCR اندوژن از سطح سلولهای Jurkat میباشد. با استفاده از دو crRNA طراحی شده در این مطالعه میتوان سامانه ویرایش ژنی CRISPER/Cpf۱ را برای حذف TCR اندوژن از سطح سلولهای T انسانی برای ایجاد درمانهای مبتنی بر سلولهای T مهندسی ژنتیکی شده آلوژن به کار برد.

Keywords:

CRISPER-Cpf۱ , از کارانداختن لکوس TRAC , حذف TCR اندوژن.