کلونینگ و ارزیابی بیوانفورماتیکی ژن مونودهیدروآسکوربات ردوکتاز (MDHAR) در گیاه آلوروپوس لیتورالیس و بررسی بیش بیان آن در گیاه توتون (Nicotina tobacum)

Publish Year: 1395
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: Persian
View: 213

This Paper With 12 Page And PDF Format Ready To Download

  • Certificate
  • من نویسنده این مقاله هستم

این Paper در بخشهای موضوعی زیر دسته بندی شده است:

استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:

لینک ثابت به این Paper:

شناسه ملی سند علمی:

JR_JCB-8-17_023

تاریخ نمایه سازی: 17 مهر 1400

Abstract:

      شوری خاک یکی از مهم­ترین عوامل غیرزنده­، با برهم زدن شرایط مطلوب است که سبب بروز اختلالات متابولیسمی در سلولهای گیاهی، از جمله افزایش تولید انواع گونه­های اکسیژن فعال (ROS) می­گردد .مونودهیدروآسکوربات ردوکتاز (MDHAR) یکی از آنزیمهای کلیدی در مسیر گلوتاتیون-آسکوربات است که نقش احیاکنندگی رادیکالهای مونودهیدروآسکوربات را بر عهده دارد. در تحقیق حاضر آنزیم مونودهیدرو آسکوربات ردوکتاز، از گیاه هالوفیت آلوروپوس لیتورالیس (Aeluropus littoralis) شناسایی، جداسازی و هم سانه­سازی گردید و به گیاه توتون انتقال داده شد. برای این منظور با توجه به اطلاعات در دسترس در پایگاه NCBI، پرایمرهای مناسب طراحی و با روش RT-PCR توالی ژنی مذکور تکثیر و به منظور توالی یابی در وکتور pTZ۵۷R/T درون باکتری ای.کلای (DH۵α) هم سانه­سازی شد. سپس به منظور انتقال به گیاه توتون، با آنزیم pfu دی. ان. آ. پلیمراز تکثیر گردید. پس از الحاق پروموتر و ترمیناتور ۳۵S به ناقل بیانی pGreen۰۰۲۹، توالی ژنی MDHAR نیز به این ناقل وارد شد و سازه­ی نوترکیب به سلول­های اگروباکتریوم نژاد LBA۴۴۰۴ ترانسفورم شد و برای تراریخت­سازی توتون به روش دیسک برگی مورد استفاده قرار گرفت. از گیاهان باززایی شده در محیط انتخابی حاوی آنتی­بیوتیک کانامایسین استخراج DNA و سپس RNA صورت گرفت و آزمون­های PCR و RT-PCR انجام شد. آزمون PCR با DNA گیاهان انتخابی نشان داد توالی ژنی MDHAR به سلول­های گیاهان تراریخت وارد شده و بیان مستمر این ژن نیز توسط آزمون RT-PCR تایید شد. بررسی­های بیوانفورماتیکی روی ژن نشان داد که ژن MDHAR شامل ۱۴۳۶ جفت باز و فاقد نواحی اینترونی است. مقایسه­ی توالی به دست آمده با توالی­های سایر MDHAR­های گیاهی ثبت شده در بانک ژن، بیانگر شباهت بالای این ژن با سایر MDHR­های جدا شده از گیاهان خانواده­ی گندمیان بوده که با MDHAR­ سورگم (Sorghum bicolor)، بیشترین شباهت را داشت. آنالیز ساختار پروتئینی، بین سلولی بودن و نواحی موتیف pyr-redoxin و SDR را اثبات کرده و نیز بررسی ساختار ثانویه، نشان­دهنده­ی ۳/۷۸ درصد ساختار مارپیچ آلفا، ۱/۴۱ درصد ساختار چین خورده ی بتا و ۶/۱۳ درصد ساختار دور بتا یا دور معکوس بود.

Keywords:

littolaris , Mono Dehydro Ascorbate Reductase (MDHAR) , Pgreen Vector , Reactive Oxygen Spices (ROS) , Tobacco , Transgenic , گونه های اکسیژن فعال , مونودهیدروآسکوربات ردوکتاز (MDHAR) , آلوروپوس لیتورالیس , ناقل pGreen۰۰۲۹ , توتون , تراریخت

مراجع و منابع این Paper:

لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این Paper را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود Paper لینک شده اند :
  • Ashraf, M. and N.A. Akram. ۲۰۰۹. Improving salinity tolerance of ...
  • Baek, K.H. and D.Z. Skinner. ۲۰۰۳. Alteration of antioxidant enzyme ...
  • Barnes, J.D., Y. Zheng and T.M. Lyons. ۲۰۰۲. Plant resistance ...
  • Bowler, C. and R. Fluhr. ۲۰۰۰. The role of calcium ...
  • Chen, H., R.S. Nelson and J.L. Sherwood. ۱۹۹۴. Enhanced recovery ...
  • Choi, S., O. Lee, S. Kwon, S. Kwak, D. Yu ...
  • Dalton, D., L. Baird, L. Langeberg, C. Taugher, W. Anyan, ...
  • Dellaporta, S.L., J. wood and J.B. Hicks. ۱۹۸۳. PMB Reporter, ...
  • Eltayeb, A.E., N. Kawano and G.H. Badawi. ۲۰۰۶. Enhanced tolerance ...
  • Eltayeb, A.E., N. Kawano, G.H. Badawi, H. Kaminaka, T. Sanekata, ...
  • Eltelib, H.A., A.A. Badejo, Y. Fujikawa and M. Esaka. ۲۰۱۱. ...
  • Eltelib, H.A., Y. FUjikawa and M. Esaka. ۲۰۱۲. Overexpression of ...
  • Gautier, H., F. Lopez-Lauri, C. Massot, R. Murshed, I. Marty, ...
  • Grantz, A., D.A. Brummell and A.B. Bennett. ۱۹۹۵. Ascorbate free-radical ...
  • Hellens, R.P., E.A. Edwards, N.R. Leyland, S. Bean and Ph.M. ...
  • Hernandez, J.A., A.B. Aguilar, B. Portillo, E. Lopez-Gomez, J.M. Beneyto, ...
  • Hossain, M.A., Y. Nakano and K. Asada. ۱۹۸۴. Monodehydroascorbate reductase ...
  • Hossain, M.A. and K. Asada. ۱۹۸۵. Monodehydroascorbate reductase from cucumber ...
  • Jimenez, A., J.A. Hernandez, L.A. del Río and F. Sevilla. ...
  • Kavitha, K., S. George, G. Venkataraman and A. Parida. ۲۰۱۰. ...
  • Li, F., SH. Xing and Q. Guo. ۲۰۱۱. Drought tolerance ...
  • Li, F., Q.Y. Wu, Y.L. Sun, L.Y. Wang, X.H. Yang ...
  • Lunde, C., U. Baumann, N.J. Shirley, D.P. Drew and G.B. ...
  • McDonald, M.B. ۱۹۹۹. Seed eterioration: physiology, repair and assessment. Seed ...
  • Munns, R. and M. Tester. ۲۰۰۸. Mechanism of salinity tolerance. ...
  • Olien, C. and M. Smith. ۱۹۷۷. Ice adhesions in relation ...
  • Ozturk, Z.N., V. Talame, M. Deyholos, C.B. Michalowski, D.W. Galbraith, ...
  • Prasad, T.K., M.D. Anderson, B.A. Martin and C.R. Stewart. ۱۹۹۴. ...
  • Rizhsky, L., H.J. Liang and R. Mittler. ۲۰۰۲. The combined ...
  • Rodrigues, R.B., G. Sabat, B.B. Minkoff, H.L. Burch, T.T. Nguyen ...
  • Sambrook, J., E.F. Fritsch and T. Maniatis. ۱۹۸۹. Molecular cloning ...
  • Shin, S.Y., I.S. Kim, Y.S. Kim, H. Lee and H.S. ...
  • Shin, S.Y., M.H. Kim, Y.H. Kim۳, H.M. Park and H.S. ...
  • Vaidyanathan, H., P. Sivakumar, R. Chakrabarsty and G. Thomas. ۲۰۰۳. ...
  • Yabuta, Y., T. Maruta, K. Yoshimura, T. Ishikawa and S. ...
  • Yoon, H.S., H. Lee, I.A. Lee, K.Y. Kim and J.K. ...
  • نمایش کامل مراجع