تولید موتانت غیرسمی توکسین دیفتری در اشرشیاکلی در فرم محلول بر اساس فیوژن با تگ سومو و تنظیم شرایط ابراز ژن

پروتئین CRM۱۹۷ موتانت غیر سمی توکسین دیفتری است که بعنوان حامل در ساخت واکسنهای کنژوگه بکار میرود. تولیدتجاری آن در در سویه Corynebacterium diphtheriae C۷(β۱۹۷)(tox) دارای بازدهی پایین است. لذا تولید نوترکیبآن مورد توجه است.اشرشیاکلی میزبان متداول در تولید پروتتین های نوترکیب است اما مشکل آن در ایجاد اینکلوژن بادی است.بنابراین در این مطالعه به بررسی امکان تولید CRM۱۹۷ در اشرشیاکلی در فرم محلول آن پرداخته میشود. برای این منظورپروتئین مذکور بصورت فیوژن با تگهای سومو و هیستیدین با استفاده از وکتور pET۲۸a دز (E. coli BL۲۱(DE۳ بیان شد ودرصد حلالیت پروتئین حاصل با استفاده از SDS-PAGE تعیین شد. نتایج ما نشان دادند که بیان پروتئین در فرم محلول بودهاست و با کاهش دما به ۳۰˚C پروتئین تقریبا بطور کامل محلول بوده است. پس از تخلیص پروتئین با استفاده از تگ هیستیدین وحذف تگ سومو با پروتئاز سومو، پروتئین CRM۱۹۷ حاصل شد که دارای فعالیت نو کلتاز مورد انتظار بوده است. لذا به نظر میرسدروش ارائه شده در این تحقیق برای تولید پروتئین مذکور جهت استفاده های پزشکی مناسب باشد.

Keywords:

, CRM۱۹۷ , توکسین دیفتری , نوترکیب , حلالیت , پروتئاز سومو , تگ سومو