تشخیص همزمان ویروس نیوکاسل و ویروس آنفولانزای طیور در نمونه های کلینیکی با استفاده از روش Multiplex-PCR

ویروس نیوکاسل و آنفولانزا از مهمترین عوامل عفونت زای طیور می باشند . هدف از انجام این مطالعه بهینه سازی و ارزیابی یک روش تشخیصی مولکولی Multiplex-PCR برای تشخیص همزمان ویروسهای نیوکاسل NDV و آنفولانزا AIV در نمونه های کلینیکی بوده است . ضمنا در این تحقیق, میزان اختصاصی بودن و حساسیت آزمایش نیز تعیین گردید . به منظور تشخیص , NDV پرایمرهایی از توالی نوکلئوتیدی ژن F و برای تشخیص , AIV پرایمرها از ناحیه ژن ماتریکس انتخاب شدند . در آزمایش RT-PCR قطعات DNA با اندازه های قابل انتظار 320 جفت باز برای NDV و 600 جفت باز برای AIV بدست آمد . هیچ واکنش متقاطع یا غیر اختصاصی با سایر ویروسهای تنفسی طیور مشاهده نشد . محصولات PCR در وکتور R/T 57 pTZ کلون شده و تعیین توالی آنها , اختصاصی بودن آزمایشها را تائید نمود . حساسیت آزمایش برای تشخیص NDV و AIV به ترتیب 2 x 10-2 و 3 x 10-2 50 EID تعیین شد . آزمایش Multiplex-PCR همچنین قادر به تشخیص این دو ویروس در نمونه های کلینیکی گردید . در آزمایشMultiplex-Nested-PCRحساسیت آزمایش برای شناسایی هر ویروس تا 100 برابر افزایش یافت . زمان آزمایش تا حصول نتیجه به 8 ساعت تقلیل داده شد . نتایج نشانگر آن است که از این روش می توان به عنوان یک روش سریع و حساس تشخیصی برای این دو پاتوژن مهم تنفسی طیور بهره جست .