تفکیک سویه های ویروس بیماری بورس عفونی جداشده از گله های طیور ایران به وسیله آنالیز منحنی ذوب با دقت بالا High Resolution Melt

زمینه مطالعه: بیماری بورس عفونی ) Infectious bursal disease, IBD ( بیماری با واگیری بسیار بالا در طیور جوان است. برای صنعت طیور، تمایز بین جدایه های کلاسیک حاد و فوق حاد ویروس IBD اهمیت زیادی دارد تا برنامه مناسبی برای واکسیناسیون اتخاذ شود. تستهای سرولوژیک و مولکولی معمول بسیار پرزحمت، زمان بر و از نظر حساسیت متغیر می باشند. این در حالی است که منحنی ذوب با دقت بالا روشی نسبتا سریع م یباشد. هدف: این مطالعه برای تعیین میزان کارآیی روش منحنی ذوب با دقت بالا برای تفریق جدایه های مختلف بر روی تعدادی از جدایه های ایرانی ویروس IBD که قبلا ماهیت آ نها با استفاده از روش آنالیز RT-PCR/RFLP )با استفاده از پرایمرهای پروتیین VP2 ( و آنالیز سکانس برای ما مکشوف بود، طراحی شد. روش کار: در این مطالعه از جدایه های ویروس IBD برای آزمون بررسی ذوب با دقت بالا در محدوده دمایی 81 oC تا 92 پس از انجام استخراج RNA و رونوشت برداری معکوس و Real Time RT- PCR استفاده شد. نتایج: با بررسی منحنی ذوب، ویرو سهای آزمایش شده در چهار گروه A-D دسته بندی شدند. سه سویه واکسینال Gumbokal ،D78 و Bursa CE در گروه A، واکسن IBD L در گروه B، سویه واکسینال 2 Bursine در گروه C و تمامی ویرو سهای فیلد در گروه D قرار گرفتند. آنالیز نتایج منحنی ذوب با دقت بالا پس از نرمال کردن نیز نشان داد که ویرو سهای این مطالعه در چهار گروه ژنوتیپی HRM قرار گرفتند و سه ویروس Gumbokal ،D78 و Bursa CE منحنی مشابه هم و غیر قابل تفکیک از هم ایجاد کردند. اما از سایر واکسنها یا سویه های فیلد متمایز بودند. همچنین دو سویه IBD L و 2 Bursine دارای دو منحنی متفاوت و متمایز از سایر ویرو سها بودند. نتیجه گیری نهایی: از مطالعه کنونی میتوان نتیجه گرفت که تکنیک بررسی منحنی real-time RT-PCR HRM روشی مقرون به صرفه و قابل اعتماد در بین رو شهای مورد استفاده درحال حاضر است و به منظور شناسایی حدت جدای ه های جدید ویروس بورس عفونی میتواند مورد استفاده قرار گیرد.

Keywords:

بیماری بورس عفونی , آنالیز منحنی ذوب با دقت بالا , Real Time RT- PCR , طیور