تراریختی چغندرقند با ژن cry1Ab به کمک آگروباکتریوم و ایجاد گیاهان تراریخته مقاوم به آفت پرودنیا (Spodoptera littoralis)

آفات پروانه ای چغندرقند باعث خسارت شدید این محصول در اکثر نواحی زیر کشت دنیا به خصوص در ایران می شوند. به دلیل محدودبودن منابع ژنتیکی مقاومت به حشرات زیان آور و سیستم چندژنی مقاومت به این صفت، تهیه ارقام مقاوم به آفات آن از طریق اصلاح کلاسیک مشکل است. بهبود بیوتکنولوژیکی از طریق انتقال ژن های مختلف ازجمله ژن های Bt می تواند یک استراتژی مکمل و جایگزین برای مبارزه با آفات چغندرقند به حساب آید. دو رقم دیپلوئید 7233 و HM1990 جهت تراریختی به کمک Agrobacterium tumefasiens سویهGV3101 حاوی پلاسمید pBI35Scry حامل ژن cry1Ab تحت کنترل راه انداز 35S CaMV و ژن گزینشگر nptII استفاده شد و برگ حاوی پایه جوانه به عنوان ریزنمونه در تراریختی بکار رفت. جوانه های تراریخت احتمالی در محیط کشت حاوی غلظت های مختلف کانامایسین غربال شدند. آنالیز PCR، حضور ژن cry1Ab را در بیش از50 درصد گیاهچه های مقاوم به کانامایسین نشان داد. آنالیز لکه گذاری نقطه ای (dot blotting) درج حداقل یک نسخه از تراژن در ژنوم گیاهان تراریخته را تایید کرد. آنالیز وسترن با استفاده پادتن پلی کلونال اختصاصی Cry1Ab، حضور پروتئین هدف با اندازه مورد انتظار kDa 67 را در لاین های تراریخته T0 مورد بررسی نشان داد. بر اساس نتایج حاصل از آزمایش زیست سنجی با استفاده از لارو کرم برگخوار پرودنیا (Spodoptera littoralis)، گیاهان تراریخته مقاومت بهبود یافته ای بر علیه آفت، با مرگ و میر70-37 درصد در طول یک هفته، نشان دادند.

Keywords:

آفات پروانه ای , تراریختی , چغندرقند , Agrobacterium tumefasiens , ژن cry1Ab , Spodoptera littoralis