همسانه سازی و بیان آنزیم نوترکیب زایلاناز (xynA) در باکتری E. coli
Publish place: Journal of agricultural biotechnology، Vol: 12، Issue: 4
Publish Year: 1399
Type: Journal paper
Language: Persian
View: 479
This Paper With 22 Page And PDF Format Ready To Download
- Certificate
- I'm the author of the paper
این Paper در بخشهای موضوعی زیر دسته بندی شده است:
Export:
Document National Code:
JR_JOAGK-12-4_001
Index date: 2 August 2021
همسانه سازی و بیان آنزیم نوترکیب زایلاناز (xynA) در باکتری E. coli abstract
هدف: امروزه، افزایش جهانی قیمت ذرت در جیره طیور سبب جایگزینی گندم به جای ذرت شده است. اما وجود پلی ساکاریدهای غیرنشاسته ای در دیواره سلولی مانع جذب ترکیبات غذایی موجود در گندم توسط طیور می گردند. یکی از روش های حذف پلی ساکاریدهای غیرنشاسته ای موجود در گندم استفاده از آنزیم زایلاناز در جیره ی غذای طیور می باشد. زایلانازها سبب شکسته شدن پیوند اندو بتا (۴-۱) آرابینوزایلان در دیواره سلولی گندم می شود. هدف از این پژوهش تولید آنزیم نوترکیب مقاوم به حرارت زایلاناز در باکتری E. coli، به عنوان مکمل جیره غذایی طیور می باشد. مواد و روش ها: در این پژوهش ژن مقاوم به حرارت زایلاناز (xynA) در یک سیستم بیان ترشحی باکتریایی شامل: توالی شاین-دالگارنو، سیگنال پپتید ترشحی Usp۴۵ و پروموتر T۷ در پلاسمیدpET-۲۲b (+) از باکتریE. coli سویه BL۲۱ (DE۳) با استفاده از روش شوک حرارتی کلون شد. جهت القای بیان ژن نوترکیب زایلاناز از القاگر IPTG در زمان های مختلف استفاده گردید. همچنین، بررسی شاخص های کاتالیتیکی نیز طبق روش DNS صورت پذیرفت. یافته ها: نتایج حاصل از کلونی PCR وجود توالی ژن نوترکیب زایلاناز به طول bp ۷۴۳ را بر روی ژل آگارز ۱ درصد تایید نمود. ژل اکریل آمید SDS-PAGE، حضور پروتئین با وزن مولکولی kDa ۲۷ را نشان داد. همچنین میزان فعالیت پروتئین نوترکیب به مقدار ۴۷/۱۸۹ (unit/ml) با استفاده از روش DNS در دمای بهینه °C۶۵ و ۶ pH= تعیین گردید. علاوه بر این، نتایج منحنی میکائیلیس-منتن میزان ثابت میکائیلیس (Km) و حداکثر سرعت واکنش (Vmax) را برای آنزیم نوترکیب زایلاناز به ترتیب ۱/۴ (mg/ml) و ۸۷ (unit/ml) تعیین نمود. نتیجه گیری: زایلانازها مهمترین آنزیم های مکمل جیره طیور می باشند که در جیره های بر پایه گندم اضافه می شوند. نتایج نشان داد، آنزیم نوترکیب حاصل، دارای فعالیت و غلظت مناسب می باشد و مقاوم به حرارت است. همچنین آنزیم نوترکیب زایلاناز به دلیل خاصیت ترشحی بودن با هزینه اندک قابل استحصال می باشد.
همسانه سازی و بیان آنزیم نوترکیب زایلاناز (xynA) در باکتری E. coli Keywords:
همسانه سازی و بیان آنزیم نوترکیب زایلاناز (xynA) در باکتری E. coli authors
امین صادقی علیکلایه
گروه بیوتکنولوژی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهرکرد، استان چهارمحال و بختیاری، ایران
ندا میرآخورلی
استادیار، گروه بیوتکنولوژی و اصلاح نباتات، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهرکرد، شهرکرد، ایران
محمدرضا اکبری
استادیار، گروه علوم دامی و طیور، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهرکرد، شهرکرد، ایران.
بهزاد شارقی بروجنی
استاد، گروه بیوشیمی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه شهرکرد، شهرکرد، ایران.
مراجع و منابع این Paper:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این Paper را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود Paper لینک شده اند :