کلونینگ و ارزیابی بیوانفورماتیکی ژن مونودهیدروآسکوربات ردوکتاز (MDHAR) در گیاه آلوروپوس لیتورالیس و بررسی بیش بیان آن در گیاه توتون (Nicotina tobacum)
Publish place: Journal of Crop Breeding، Vol: 8، Issue: 17
Publish Year: 1395
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: Persian
View: 236
This Paper With 12 Page And PDF Format Ready To Download
- Certificate
- من نویسنده این مقاله هستم
این Paper در بخشهای موضوعی زیر دسته بندی شده است:
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_JCB-8-17_023
تاریخ نمایه سازی: 17 مهر 1400
Abstract:
شوری خاک یکی از مهمترین عوامل غیرزنده، با برهم زدن شرایط مطلوب است که سبب بروز اختلالات متابولیسمی در سلولهای گیاهی، از جمله افزایش تولید انواع گونههای اکسیژن فعال (ROS) میگردد .مونودهیدروآسکوربات ردوکتاز (MDHAR) یکی از آنزیمهای کلیدی در مسیر گلوتاتیون-آسکوربات است که نقش احیاکنندگی رادیکالهای مونودهیدروآسکوربات را بر عهده دارد. در تحقیق حاضر آنزیم مونودهیدرو آسکوربات ردوکتاز، از گیاه هالوفیت آلوروپوس لیتورالیس (Aeluropus littoralis) شناسایی، جداسازی و هم سانهسازی گردید و به گیاه توتون انتقال داده شد. برای این منظور با توجه به اطلاعات در دسترس در پایگاه NCBI، پرایمرهای مناسب طراحی و با روش RT-PCR توالی ژنی مذکور تکثیر و به منظور توالی یابی در وکتور pTZ۵۷R/T درون باکتری ای.کلای (DH۵α) هم سانهسازی شد. سپس به منظور انتقال به گیاه توتون، با آنزیم pfu دی. ان. آ. پلیمراز تکثیر گردید. پس از الحاق پروموتر و ترمیناتور ۳۵S به ناقل بیانی pGreen۰۰۲۹، توالی ژنی MDHAR نیز به این ناقل وارد شد و سازهی نوترکیب به سلولهای اگروباکتریوم نژاد LBA۴۴۰۴ ترانسفورم شد و برای تراریختسازی توتون به روش دیسک برگی مورد استفاده قرار گرفت. از گیاهان باززایی شده در محیط انتخابی حاوی آنتیبیوتیک کانامایسین استخراج DNA و سپس RNA صورت گرفت و آزمونهای PCR و RT-PCR انجام شد. آزمون PCR با DNA گیاهان انتخابی نشان داد توالی ژنی MDHAR به سلولهای گیاهان تراریخت وارد شده و بیان مستمر این ژن نیز توسط آزمون RT-PCR تایید شد. بررسیهای بیوانفورماتیکی روی ژن نشان داد که ژن MDHAR شامل ۱۴۳۶ جفت باز و فاقد نواحی اینترونی است. مقایسهی توالی به دست آمده با توالیهای سایر MDHARهای گیاهی ثبت شده در بانک ژن، بیانگر شباهت بالای این ژن با سایر MDHRهای جدا شده از گیاهان خانوادهی گندمیان بوده که با MDHAR سورگم (Sorghum bicolor)، بیشترین شباهت را داشت. آنالیز ساختار پروتئینی، بین سلولی بودن و نواحی موتیف pyr-redoxin و SDR را اثبات کرده و نیز بررسی ساختار ثانویه، نشاندهندهی ۳/۷۸ درصد ساختار مارپیچ آلفا، ۱/۴۱ درصد ساختار چین خورده ی بتا و ۶/۱۳ درصد ساختار دور بتا یا دور معکوس بود.
Keywords:
littolaris , Mono Dehydro Ascorbate Reductase (MDHAR) , Pgreen Vector , Reactive Oxygen Spices (ROS) , Tobacco , Transgenic , گونه های اکسیژن فعال , مونودهیدروآسکوربات ردوکتاز (MDHAR) , آلوروپوس لیتورالیس , ناقل pGreen۰۰۲۹ , توتون , تراریخت
مراجع و منابع این Paper:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این Paper را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود Paper لینک شده اند :