استفاده از روش Nested- PCR برای شناسایی سروتیپ های ویروس برونشیت عفونی در گله های گوشتی دارای علائم تنفسی

بیماری برونشیت عفونی، یک بیماری ویروسی تنفسی حاد و بسیار واگیر ماکیان است که به دلیل کاهش رشد، کاهش بازده غذائی، ایجاد عفونت هایتوأم که منجر به تورم کیسه های هوائی و حذف لاشه های طیور در کشتارگاه ها می شود از اهمیت اقتصادی بالائی در طیور گوشتی برخوردار است. به منظور تعیین نقش سروتیپ های ویروس برونشیت عفونی در ایجاد عفونت تنفسی در گله های گوشتی در پاییز و زمستان 1390 از 9 گله جوجه گوشتیواقع در غرب مازندران که دارای علائم تنفسی بودند نمونه گیری از نای، کلیه، سکال تونسیل به عمل آمد. ابتدا نمونه ها به تخم مرغ جنین دار 10 تا 11 روزه تلقیح شد، سپس مایع آلانتوئیک تخم مرغ های تلقیح شده از نظر خاصیت هماگلوتیناسیون (HA) برای ویروس های ND و AI ارزیابی شده و نمونه های مثبت با انتی سرم اختصاصی نیوکاسل و آنفلوانزا مجاور شدند و از نظر وجود ویروس نیوکاسل یا آنفلوانزا به روش HI مورد بررسی قرار گرفتندد . برای شناسایی ویروس برونشیت عفونی ابتدا RNA ویروس با استفاده از کیت تخلیص RNA از مایع آلاتنوئیک استخراج شد و در ادامه با استفاده از روش RT-PCR و با پرایمرهای عمومی اقدام به شناسائی ویروس برونشیت عفونی نموده واز محصول RT-PCR با استفاده از پرایمر های اختصاصی به روش Nested PCR اقدام به شناسایی سروتیپ های ویروس برونشیت عفونی شد. از مجموع 9 نمونه اخذ شده از مزارع طیور گوشتی، 6 مورد از نظر ویروس های تنفسی مثبت بودند. از نظر برونشیت عفونی، در واکنش RT-PCR با پرایمر عمومی برونشیت عفونی 4 مورد مثبت شدند و در واکنش Nested PCR همه موارد از نظر سروتیپ 4/91 و mass مثبت شدند.

Keywords:

گله گوشتی , عفونت تنفسی , برونشیت عفونی , سروتیپ Nested-PCR , مازندران