تاثیر شرایط محیطی بر بیان پروتیین Hsp 70 نوترکیب Rutilus Frisii Kutum در باکتری E. Coli

چپرون های مولکولی از جمله پروتیین های شوک حرارتی از عوامل حیاتی برای بقای سلول ها هستند و در تاخوردگی صحیح پروتیین ها نقش اساسی را بازی می کنند. پروتیین شوک حرارتی 70 مولکولی است که فعالیت چپرونی وابسته به هیدرولیز آدنوزین تری فسفات داشته و برای تداوم عملکرد خود به پروتیین های با دمین J نیاز دارد تا آنرا به سوبسترا متصل کنند. ما در این مطالعه به اثر دما و pH بر میزان بیان پروتیین نوترکیب Hsp70 ماهی Rutilus Frisii Kutum در باکتری E. Coli پرداختیم. ژن hsp70 ماهی Rutilus Frisii Kutum با استفاده از وکتور pET-28a (+) به باکتری E. coli ترانسفورم شد. جهت تعیین شرایط بهینه، بیان Hsp70 را در زمان های 2، 4، 6،8، 12، 24، 36، 48 ساعت، دماهای 20، 25، 30، 45 ، 37 درجه سلسیوس و و PH های 7.5، 5، 9 مورد مطالعه قرار دادیم. میزان بیان پروتیین با استفاده از ژل SDS-PAGE 12% رنگ آمیزی کوماسی آبی و نرم افزار MN مورد ارزیابی قرار گرفت. پروتیینHsp 70 نوترکیب در زمان 2 ساعت، دمای 20 درجه و PH9 کمترین میزان و در زمان 4 ساعت، دمای 37 درجه و PH=5 بیشترین بیان را دارد. شرایط بهینه جهت بیان Hsp 70 نوترکیب در دمای 37 درجه و PH=5 می باشد. مطالعات ساختاری و نیز تاثیر عوامل دیگر بر بیان این پروتیین در حال مطالعه است.

Keywords:

پروتیین شوک حرارتی , تاخوردگی پروتیین , E. coli , , Rutilus Frisii Kutum , چپرون